真空冷凍干燥機(jī)：助力豬血中提取抗菌肽

  由于真空冷凍干燥機(jī)具有其它干燥方法*的優(yōu)點(diǎn)，因此真空冷凍干燥機(jī)一直以來越來越受到人們的青睞，在醫(yī)藥、生物制品和食品、化工方面的應(yīng)用已日益廣泛。

  利用真空冷凍干燥機(jī)從豬血中提取抗菌肽，屬于天然提取物，具有天然、無毒、無污染、無殘留、*、抗菌等特點(diǎn)，是一種新型的綠色抗微生物藥物。

  利用真空冷凍干燥機(jī)從豬血中提取抗菌肽，它包括以下具體步驟:

  (1)豬血采集:從屠宰場采取新鮮豬血2-3L，使用5%檸檬酸鈉抗凝；

  (2)萃取溶液:將新鮮豬血放置37℃溫箱靜置L_2h取上清，按照1:4的比例加入0.84%氯化銨溶液，混勻靜置3min,常溫400r/Min,離心10min,棄上清按比例加入氯化銨溶液混勻靜置3min,再次500r/Min離心10min ;棄上清,使沉淀與少量冷的生理鹽水，即4℃的生理鹽水短時(shí)間混合，再用200ml冷的10%冰醋酸，即4℃的10%冰醋酸使沉淀懸浮，充分混勻，倒入50ml燒杯，超聲波處理50次，然后溶液使用磁力攪拌器混勻攪動(dòng)于4℃下萃取一夜；次日，將萃取的溶液取出15000r/Min離心30min，取上清4℃下保存，沉淀再次混懸于冷的10%醋酸中，充分混勻，混勻攪動(dòng)于4℃下萃取一夜；第三天將萃取的溶液取出15000r/Min離心30min,zui后將溶液4℃下保存；

  (3)溶液除酸、濃縮、凍干:合并所保存的溶液，將溶液注入透析袋，扎緊袋口，然后將其放入燒杯，再向燒杯中倒入蒸餾水，蒸餾水液面要超過透析袋，4℃下透析除酸，每12h換水一次，直至透析袋外蒸餾水PH大于6，將透析袋放入瓷盤中，撒上聚乙二醇6000，透析濃縮約3-4h后即可將透析袋取出，將濃縮的溶液取出，放進(jìn)真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)真空低溫凍干，轉(zhuǎn)移至青霉素小瓶中，密封-20℃保存；

  (4)抗菌肽的分離:將凍干樣品用0.5%甲醇溶解，再上樣于層析柱葡聚糖凝膠SephadexG25,同時(shí)打開柱的下端出口，注意控制流速為LmL/Min,5mL/管；用部分收集器收集洗脫液，5mL/管，收集的溶液用紫外分光光度計(jì)測其在280nm處的吸收值，將在280nm處有吸收的溶液分裝于青霉素瓶中，再在真空冷凍干燥機(jī)中低溫凍干，-80℃保存；取各瓶凍干保存的樣品各20mg，分別溶于滅菌雙蒸水中，無菌條件下用微孔濾膜過濾樣品，將藥敏紙片浸泡于過濾后的樣品中，浸泡一個(gè)晚上后，用平皿紙片法初篩，收集具有抗菌活性的組分，置于5℃保存；

  (5)抗菌肽的純化與濃縮:使用超濾裝置進(jìn)行超濾，膜包選用截流分子量為20kD。洗脫液選用0.5%甲醇溶液，濾出液既為所要獲得的溶液。

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